分光光度計(jì)是根據(jù)物質(zhì)對(duì)光的選擇性吸收波長(zhǎng)，以及相應(yīng)的吸收系數(shù)是該物質(zhì)的物理常數(shù)。當(dāng)我們?cè)谝阎臣兾镔|(zhì)在一定條件下的吸收系數(shù)后可用同樣條件將該供試品配成溶液，分光光度計(jì)測(cè)定其吸收度,即可由上式計(jì)算出供試品中該物質(zhì)的含量。在可見(jiàn)光區(qū)，除某些物質(zhì)對(duì)光有吸收外，很多物質(zhì)本身并沒(méi)有吸收但可在一定條件下加入顯色試劑或經(jīng)過(guò)處理使其顯色后再測(cè)定,故又稱(chēng)比色分析。由于顯色時(shí)影響呈色深淺的因素較多，且常使用單色光純度較差的儀器，故測(cè)定時(shí)應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)品或?qū)φ掌吠瑫r(shí)操作。

產(chǎn)品特點(diǎn)

采用高性能*光柵，波長(zhǎng)精度更高；

采用進(jìn)口鎢燈，發(fā)光效率高，使用壽命長(zhǎng)，功耗降低；

超大規(guī)模集成，T/A轉(zhuǎn)換精度高，穩(wěn)定性高；

微機(jī)系統(tǒng)的應(yīng)用，使操作使用簡(jiǎn)單可靠。

儀器構(gòu)成

分光光度計(jì)已經(jīng)成為現(xiàn)代分子生物實(shí)驗(yàn)室常規(guī)儀器。常用于核酸，蛋白定量以及細(xì)菌生長(zhǎng)濃度的定量。

儀器主要由光源、單色器、樣品室、檢測(cè)器、信號(hào)處理器和顯示與存儲(chǔ)系統(tǒng)組成。

光譜范圍

包括波長(zhǎng)范圍為400~760 nm的可見(jiàn)光區(qū)和波長(zhǎng)范圍為200～400 nm的紫外光區(qū).不同的光源都有其特有的發(fā)射光譜,因此可采用不同的發(fā)光體作為儀器的光源.

鎢燈的發(fā)射光譜:鎢燈光源所發(fā)出的400～760nm波長(zhǎng)的光譜光通過(guò)三棱鏡折射后,可得到由紅橙,黃綠,藍(lán)靛,紫組成的連續(xù)色譜;該色譜可作為可見(jiàn)光分光光度計(jì)的光源.

氫燈（或氘燈）的發(fā)射光譜:氫燈能發(fā)出185～400 nm波長(zhǎng)的光譜可作為紫外光光度計(jì)的光源.

物質(zhì)的吸收光譜(1)

如果在光源和棱鏡之間放上某種物質(zhì)的溶液,此時(shí)在屏上所顯示的光譜已不再是光源的光譜它出現(xiàn)了幾條暗線(xiàn),即光源發(fā)射光譜中某些波長(zhǎng)的光因溶液吸收而消失這種被溶液吸收后的光譜稱(chēng)為該溶液的吸收光譜.

不同物質(zhì)的吸收光譜是不同的.因此根據(jù)吸收光譜,可以鑒別溶液中所含的物質(zhì).

物質(zhì)的吸收光譜(2)

當(dāng)光線(xiàn)通過(guò)某種物質(zhì)的溶液時(shí)透過(guò)的光的強(qiáng)度減弱.因?yàn)橛幸徊糠止庠谌芤旱谋砻娣瓷浠蚍稚?一部分光被組成此溶液的物質(zhì)所吸收只有一部分光可透過(guò)溶液.

入射光= 反射光 + 分散光 + 吸收光 + 透過(guò)光

如果我們用蒸餾水(或組成此溶液的溶劑)作為"空白"去校正反射,分散等因素造成的入射光的損失則:

入射光 = 吸收光 十 透過(guò)光

原理

分光光度計(jì)采用一個(gè)可以產(chǎn)生多個(gè)波長(zhǎng)的光源，通過(guò)系列分光裝置，從而產(chǎn)生特定波長(zhǎng)的光源，光線(xiàn)透過(guò)測(cè)試的樣品后，部分光線(xiàn)被吸收，計(jì)算樣品的吸光值，從而轉(zhuǎn)化成樣品的濃度。樣品的吸光值與樣品的濃度成正比。

單色光輻射穿過(guò)被測(cè)物質(zhì)溶液時(shí)，被該物質(zhì)吸收的量與該物質(zhì)的濃度和液層的厚度（光路長(zhǎng)度）成正比，其關(guān)系如下式：

　　A=-lg(I/I。)=-lgT=kLc

　　式中 :A 為吸光度；

　　I。為入射的單色光強(qiáng)度；

　　I 為透射的單色光強(qiáng)度；

　　T 為物質(zhì)的透射率；

　　k 為摩爾吸收系數(shù)；

　　L 為被分析物質(zhì)的光程，即比色皿的邊長(zhǎng)

     c 為物質(zhì)的濃度

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